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Análisis genético del carcinoma de tiroides en una muestra de pacientes colombianos

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dc.contributor.authorEstrada Florez, Ana Patriciaspa
dc.coverage.spatialColombiaspa
dc.date.accessioned2015-09-08T22:47:38Z
dc.date.available2015-09-08T22:47:38Z
dc.date.issued2015-08
dc.description109 Páginasspa
dc.descriptionRecurso Electrónicospa
dc.description.abstractEl carcinoma de tiroides (CT) es la neoplasia más común del sistema endocrino y su incidencia en Colombia se ha incrementado en los últimos años. El cáncer es una enfermedad genética, esporádica o hereditaria, que puede desencadenarse por interacción de factores genéticos y ambientales. Diversos estudios epidemiológicos, han mostrado una relación entre el riesgo de padecer CT y el impacto de factores externos como: el estrato socioeconómico, el nivel educativo y el consumo de alcohol y cigarrillo. De otra parte, dado que existe una mayor incidencia en el género femenino, se ha planteado la posibilidad de encontrar diferencias de tipo hormonal, entre casos y controles sanos, evaluando factores como la planificación hormonal, la edad de la menarquia y menopausia, el número de hijos nacidos vivos y la lactancia. Teniendo en cuenta lo anterior, en el presente estudio, se analizaron dichos factores a partir de las entrevistas de 253 pacientes, pareados por género y lugar de procedencia, con controles sanos, mayores de 50 años y sin antecedentes familiares de cáncer en primer y segundo grado de consanguineidad. Se evidenció una mayor ocurrencia de cáncer de tiroides en las mujeres que en los hombres, con una relación de 8:1; el carcinoma papilar fue el más frecuente (93,5%), seguido por el folicular (5,9%) y medular (<1%). La edad promedio de diagnóstico fue de 46 años en casos con carcinoma papilar de tiroides (PTC, por sus siglas en inglés), y de 45 años en hombres y 60 años en mujeres con carcinoma folicular de tiroides (FTC, por sus siglas en inglés). El análisis del riesgo mediante el cálculo de Odds ratio (OR), reveló que existe un incremento significativo en el riesgo de padecer la enfermedad en pacientes de estrato socioeconómico medio-alto y el nivel de escolaridad superior, además, se presentó un incremento del riesgo en los casos que presentaron menarquia temprana, planificación hormonal y menopausia no funcional. 17 De otra parte, en cuatro análisis GWAs de pacientes de Europa y Asia, se ha reportado el incremento de la susceptibilidad en personas con el alelo de riesgo para los polimorfismos de los SNPs: rs1867277, rs965513, rs944289, rs116909374, rs2439302, rs966423 y rs6983267, y considerando que no han sido estudiados en poblaciones de América del Sur, se realizó la genotipificación alelo especifica de estos polimorfismos, usando el sistema KASPAR. A partir de los genotipos obtenidos, se realizaron pruebas de equilibrio de Hardy Weingber (HW) y de asociación en el programa Plink, encontrándose que todos presentan un incremento significativo del riesgo, a excepción del rs966423, que no cumplió con el equilibrio de HW, por lo tanto, no se incluyó en los cálculos de OR individuales y combinados. El análisis combinado de los SNPs rs965513, rs944289, rs116909374, rs2439302 y rs6983267, reveló estar relacionados con una probabilidad tres veces superior en los portadores de 7 o más alelos riesgo. La mayor parte de los diagnósticos actuales no son concluyentes, pues se basan en la aspiración por aguja delgada (BACAF). Afortunadamente, ha tomado fuerza el diagnóstico molecular, basado en el análisis de mutaciones en genes como BRAF, asociados con el desarrollo, mal pronóstico, recurrencia, metástasis de la enfermedad y respuesta a tratamientos pre y post quirúrgicos. Por esta razón, se amplificó y secuenció el exón 15 del gen BRAF, en el ADN de 164 muestras de tejido tumoral tiroideo, encontrándose que la mutación V600E, se presentó en el 55% de las muestras de PTC, sin variaciones entre género y edad de diagnóstico, pero con una mayor frecuencia en casos con complicaciones como lesiones bilaterales, mayores a 1cm y con metástasis a ganglios linfáticos. Adicionalmente, se realizó la detección por PCR aleloespecifica de esta mutación en muestras de sangre de 239 pacientes, las cuales fueron homocigotas para el alelo silvestres en su totalidad, confirmando la naturaleza esporádica y especificidad de la mutación V600E en este tipo histológico.spa
dc.description.abstractABSTRACT. The thyroid carcinoma (CT) is the most common endocrine neoplasia and its incidence in Colombia has increased in recent years. Cancer is a genetic, sporadic or inherited disease that can be triggered by interaction of genetic and environmental factors. Several epidemiological studies have shown a relationship between the risk of CT and the impact of external factors such as: socioeconomic status, educational level and consumption of alcohol and cigarettes. Moreover, since there is a higher incidence in females, has raised the possibility of finding hormonal differences between cases and healthy controls, it has evaluated factors such as hormonal planning, age at menarche and menopause, the number of live births and breastfeeding. Considering the above, in the present study, we evaluated these factors using interviews of 253 patients, matched by gender and geographical origin, with healthy controls, older than 50 years and without family history of cancer in first and second degree of consanguinity. An increased occurrence of TC was evident in women than in men, with a ratio of 8:1; papillary carcinoma was the most frequent (93.5%), followed by follicular (5.9%) and medullar (<1%). The average age at diagnosis was 46 years in cases with PTC, 45 in men and 60 in women with FTC. Risk analysis by calculating odds ratio (OR), revealed a significant increase in the risk of disease in patients with medium-high socioeconomic status and higher educational level, also it showed an increased risk in cases with early menarche, hormonal contraception and artificial menopause. Moreover, in four analyzes GWAs of patients from Europe and Asia, has reported increased susceptibility in people with risk allele for polymorphisms (SNPs): rs1867277, rs965513, rs944289, rs116909374, rs2439302, rs966423 and rs6983267 and considering that they have not been studied in populations of South America, we genotyped these polymorphisms by allele specific PCR, using KASPAR system. From the genotypes obtained we performed Hardy Weinberg (HW) and association tests in the 19 software Plink, finding that all are involved in a significantly increased risk, except for rs966423, which did not fulfilled the HW equilibrium test, therefore, it was not included in the calculations of individual and combined OR. The combined analysis of SNPs: rs965513, rs944289, rs116909374, rs2439302 and rs6983267, showed a three-fold increased probability of disease in carriers of 7 or more risk alleles. Most of the current diagnosis are inconclusive, since they are based on fine needle aspiration (FNA). Fortunately, molecular diagnostics have gained strength, based on the analysis of mutations in genes such as BRAF, associated with the development, poor prognosis, recurrence, metastasis of the disease and response to pre and post surgical treatments. For this reason, we amplified and sequenced exon 15 of the BRAF gene in DNA in 164 tumor samples of thyroid, finding that the V600E mutation occurred in 55% of samples PTC, without differences between genders and age of diagnosis, but it was more often in cases with complications such as: bilateral lesions, size bigger than 1 cm and with lymph node metastases. Additionally, we performed the detection by allele specific PCR of this mutation in blood samples from 239 patients and all of they were homozygous for the wild allele, confirming that V600E is a sporadic and specificity mutation in this histological type.spa
dc.description.tableofcontentsINTRODUCCIÓN 20 1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 22 2. JUSTIFICACIÓN 24 3. OBJETIVOS 26 3.1 OBJETIVO GENERAL 26 3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS 26 4. HIPÓTESIS 27 5. MARCO TERICO Y ANTECEDENTES 28 5.1 LA GLÁNDULA TIROIDES 28 5.2 CARCINOMA DE TIROIDES 29 5.2.1 Carcinoma Papilar de Tiroides (PTC) 30 5.2.2 Carcinoma Folicular de Tiroides (FTC) 33 5.2.3 Carcinoma Anaplásico o indiferenciado de tiroides (ATC) 33 5.2.4 Carcinoma Pobremente Diferenciado de Tiroides (PDTC) 34 5.2.5 Cáncer de tiroides del epitelio folicular asociado a síndromes hereditarios 34 5.2.6 Cáncer medular de Tiroides (MTC) 35 5.3 ESTADIFICACIÓN 35 5.4 EPIGENETICA Y CANCER DE TIROIDES 38 5.5 FACTORES DE RIESGO 40 5.6 TIPIFICACIÓN DE POLIMORFISMOS RELACIONADOS CON LA SUSCEPTIBILIDAD AL CARCINOMA DE TIROIDES 42 5.7 IMPORTANCIA DE LAS MUTACIONES DEL GEN BRAF EN EL CARCINOMA DE TIROIDES 45 6. METODOLOGÍA 47 6.1. OBTENCIÓN DE INFORMACIÓN BÁSICA Y MUESTRAS 47 6.1.1 Aprobación ética 47 6.1.2 Manejo de la información 47 6.1.3 Toma de Muestras de sangre 48 6.1.4. Muestras del tumor 48 6.2. PROCESAMIENTO DE MUESTRAS EN LABORATORIO 49 6.2.1. Extracción y cuantificación de ADN 49 6.2.2. Genotipificación de SNPs 51 6.2.3. Amplificación y análisis de secuencias del gen BRAF 54 6.3. ANÁLISIS ESTADISTICOS 57 7. RESULTADOS Y DISCUSION 59 7.1. CARACTERISTICAS DE LA MUESTRA 59 7.2. ANTECEDENTES FAMILIARES DE ADENOCARCINOMAS 77 7.3. CARACTERISTICAS DEL TUMOR 81 7.4. ANÁLISIS MOLECULARES 89 7.4.1. Polimorfismos y riesgo de cáncer de tiroides 89 7.4.2. Polimorfismos combinados y riesgo de cáncer papilar de tiroides 107 7.4.3. Modelo de regresión logística para el riesgo de padecer cáncer de tiroides según factores de riesgo ambientales y genéticos 115 7.4.4. Mutación V600E del gen BRAF 117 9. CONCLUSIONES 126 RECOMENDACIONES 127 REFERENCIAS ANEXOSspa
dc.format.mimetypeapplication/pdfspa
dc.identifier.citationEstrada Florez, Ana Patricia. Análisis genético del carcinoma de tiroides en una muestra de pacientes colombianos. Ibagué : Universidad del Tolima, 2015.<http://repository.ut.edu.co/handle/001/1531>spa
dc.identifier.urihttps://repository.ut.edu.co/handle/001/1531
dc.language.isospaspa
dc.publisherIbagué : Universidad del Tolima, 2015spa
dc.publisher.providerCountryFacultad de Ciencias, Programa de Maestría en Ciencias Biologicasspa
dc.rightsAtribución-NoComercial-CompartirIgual 2.5 Colombia (CC BY-NC-SA 2-5 CO)spa
dc.rights.accessrightsinfo:eu-repo/semantics/openAccessspa
dc.rights.urihttp://www.creativecommons.org/licenses by-nc/2.5/co/spa
dc.subjectCarcinoma de tiroidesspa
dc.subjectGenotipificaciónspa
dc.subjectADNspa
dc.subjectSangrespa
dc.subjectMutación V600Espa
dc.subjectGen BRAFspa
dc.subjectSNPs de susceptibilidadspa
dc.subjectThyroid carcinomaeng
dc.subjectGenotypingeng
dc.subjectBlood and Tissue DNAeng
dc.subjectV600E mutationeng
dc.subjectBRAFeng
dc.subjectSusceptibility gene SNPseng
dc.thesis.disciplineFacultad de Ciencias, Programa de Maestría en Ciencias Biologicasspa
dc.thesis.grantorEcheverry de Polanco, María Magdalena(Directora)spa
dc.thesis.grantorCarvajal Carmona, Luis Guillermo (Codirector)spa
dc.thesis.levelMaestríaspa
dc.thesis.nameMagíster en Ciencias Biológicasspa
dc.titleAnálisis genético del carcinoma de tiroides en una muestra de pacientes colombianosspa
dc.typeTrabajo de grado - Maestríaspa
dc.type.dcmi-type-vocabularyTextspa
dc.type.driverinfo:eu-repo/semantics/masterThesisspa
dc.type.versioninfo:eu-repo/semantics/publishedVersionspa
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