Examinando por Materia "Plaqueo en medio sólido"

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    Obtención y caracterización molecular de clones de trypanosoma cruzi seleccionados mediante plaqueo directo en medio sólido del contenido de la ampolla rectal de rhodnius colombiensis, r. pallescens y r. prolixus procedentes de diferentes regiones de Colombia
    (Ibagué: Universidad del Tolima, 2011., 2011) Villa Villamil, Lina Marcela; Vallejo, Gustavo Adolfo (Director)
    Mediante este estudio fue posible obtener y aislar clones de Trypanosoma cruzi a partir del contenido de la ampolla rectal de vectores silvestres (Rhodnius colombiensis, R. prolixus y R. pallescens) utilizando el método de plaqueo en medio sólido. El rango óptimo para obtener clones fue entre 700-800 parásitos/100μl, observando colonias entre 30-35 días pos-plaqueo. La eficacia de plaqueos positivos fue superior para los vectores Rhodnius colombiensis y R. pallescens, presentando mayores infecciones reflejadas en un aumento del número de clones, siendo opuesto a lo observado para R. prolixus, esto posiblemente debido a la presencia de diferentes microorganismos, los cuales pueden favorecer o inhibir el crecimiento del parásito. La técnica de plaqueo permitió obtener una misma línea genética (clon), comprobado por reclonación y caracterización molecular por PCR específico y RAPD’s, mostrando idéntico perfil entre los clones obtenidos a partir del clon parental y el clon parental. Se observó, que un clon silvestre puede presentar un solo haplotipo (TcIa o TcIb o TcId) o diferentes haplotipos (TcIa/TcIb, TcIa/TcId, TcIb/TcId o TcIa/TcIb/TcId), para explicar esto se plantearon dos hipótesis: 1. Posiblemente la eficiencia de los iniciadores está siendo afectada por un problema de anillamiento, razón por la cual, se realizó la modificación del iniciador 1A (1Am) permitiendo la identificación específica para el haplotipo TcIa, en cepas de origen humano como de origen silvestre. Las cepas de humanos presentaron el perfil de TcIa y las silvestres no lo mostraron, indicando que si se halla este haplotipo (TcIa) es de origen doméstico y la ausencia de este perfil es origen silvestre, definiéndose ciertamente para Colombia dos grandes grupos, uno de origen doméstico y otro de origen silvestre. Esto fue soportado por el análisis de RAPDs donde las cepas aisladas de humanos (TcIa), se agruparon independiente a los clones de los vectores silvestres, indicando diferencias en su genoma respecto a los clones, confirmando la posible existencia de los dos grupos. 2. Pueden existir copias múltiples en tandem de secuencias repetidas y variables de SL-IR del gen miniexon, que privilegian en un momento dado un haplotipo más que a otro, indicando que en un solo clon puede presentar variabilidad entre las copias de la SL-IR, implicando la posible ocurrencia de por lo menos dos diferentes haplotipos, teniendo en cuenta que sería uno en cada cromosoma homólogo ya que T. cruzi es considerado un organismo diploide. Esta variabilidad es soportada con la amplificación de TcIe reportado como exclusivo de países del cono sur de Suramérica. Se recomienda el empleo de otros marcadores moleculares que puedan mostrar la asociación de los ciclos doméstico y silvestre en nuestro país.