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dc.contributor.authorArévalo Cortés, Andrea Cisneyspa
dc.date.accessioned2015-05-20T20:25:40Z-
dc.date.available2015-05-20T20:25:40Z-
dc.date.issued2011-
dc.identifier.citationArévalo Cortés, Andrea Cisney. Efecto de la infección con leishmania panamensis, l. mexicana y l. donovani sobre la apoptosis de macrófagos u937. Ibagué: Universidad del Tolima, 2011. <http://repository.ut.edu.co/handle/001/1399>spa
dc.identifier.otherCD 3399-
dc.identifier.urihttp://repository.ut.edu.co/handle/001/1399-
dc.description116 Páginasspa
dc.description.abstractque les permite sobrevivir, replicarse y protegerse del ataque directo del sistema inmunitario. Otros en cambio, pueden inducirla para garantizar la fagocitosis por parte de otra célula hospedera y perpetuar la infección. Con el fin de establecer si diferentes subgéneros de especies de Leishmania usan la apoptosis para promover la persistencia de la infección, se evaluó el efecto de la infección con L. panamensis, L. mexicana y L. donovani en la apoptosis de macrófagos humanos de la línea U937. En el presente trabajo, L. donovani se utilizó como control, ya que esta especie inhibe la apoptosis de la célula hospedera. Hasta el momento no se conoce si las especies de Leishmania del subgénero Viannia inducen o inhiben la apoptosis de las células hospederas, razón que fundamenta el trabajo que se ha planteado en el presente estudio. Para este trabajo se infectaron macrófagos humanos U937 con L. panamensis, L. mexicana y L. donovani. Los macrófagos infectados y no infectados se trataron con inductores de apoptosis: estaurosporina, camptothecina y D-PBS, durante 8, 24, 48 y 72 horas. Mediante citometría de flujo, se evaluó la exteriorización de fosfatidilserina con Annexin V-PE y 7AAD y la fragmentación de ADN con el ensayo de TUNEL. Además, se determinó la viabilidad de amastigotes en células apoptóticas mediante tinción con Syto 16 (viabilidad) y Annexin V-Alexa 568 (apoptosis), mediante microscopía de fluorescencia. En este trabajo se observó que la infección con L panamensis indujo exteriorización de fosfatidilserina en el macrófago. Ésta no modificó los niveles de dicho fosfolípido del macrófago frente a un estímulo de apoptosis como estaurosporina, camptothecina y D-PBS. Además, esta especie no inhibió, ni indujo la fragmentación del ADN de la célula hospedera. L. mexicana, por su parte, no produjo efecto en la externalización de la fosfatidilserina del macrófago, pero inhibió de forma significativa la fragmentación del ADN en el mismo. La infección con L. donovani inhibió la externalización de la fosfatidilserina y la fragmentación del ADN de la célula fagocítica. Aunque L. panamensis y L. mexicana fueron más infectivas que L. donovani no fue posible correlacionar la infectividad con el efecto que causan las especies sobre la apoptosis del macrófago. Estos resultados serán importantes para considerar que el fenómeno de persistencia en la leishmaniasis puede estar relacionado a un evento de inducción de la externalización de fosfatidilserina, ya que es una señal de “silenciamiento” del mecanismo efector del macrófago. Además, en el presente trabajo se comprobó que en las células apoptóticas sobrevivieron los amastigotes de las tres especies de Leishmania evaluadas y se observaron parásitos vivos dentro de cuerpos apoptóticos que pueden ser la forma para pasar desapercibidos por el sistema inmune y lograr perpetuar la infección en su hospedero definitivo, el macrófago.spa
dc.description.tableofcontentsINTRODUCCIÓN 16 1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 17 2. MARCO TEÓRICO Y ANTECEDENTES 18 2.1 GENERALIDADES SOBRE LEISHMANIASIS 18 2.1.1 Formas clínicas 18 2.1.2 Epidemiología 18 2.1.3 Transmisión y persistencia 19 2.1.4 Mecanismos de persistencia de Leishmania en el macrófago 20 2.2 GENERALIDADES SOBRE APOPTOSIS 21 2.2.1 Vías de inducción de apoptosis 22 2.2.1.1 Vía intrínseca o mitocondrial 22 2.2.1.2 Vía extrínseca o de los receptores de muerte 23 2.2.2 Drogas que se emplean para la inducción de apoptosis 24 2.3 APOPTOSIS E INFECCIÓN 25 2.3.1 Efecto de la apoptosis del parásito Leishmania sobre el curso de la infección 26 2.3.2 Efecto de la infección con microorganismos intracelulares sobre la apoptosis de la célula hospedera 28 3. OBJETIVOS E HIPÓTESIS 38 7 pág. 3.1 OBJETIVO GENERAL 38 3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS 38 3.3 HIPÓTESIS 38 4. DISEÑO METODOLÓGICO 39 4.1 PARÁSITOS 39 4.2 DETERMINACIÓN DE LA DOSIS LETAL 50 (DL50) A LA NEOMICINA 39 4.3 TRANSFECCIÓN DE L. panamensis, L. mexicana Y L. donovani 39 4.4 CULTIVO DE PROMASTIGOTES DE L. panamensis, L. mexicana Y L. donovani 43 4.5 CULTIVO DE LA LÍNEA CELULAR U-937 44 4.6 DIFERENCIACIÓN DE CÉLULAS U-937 44 4.7 INFECCIÓN DE MACRÓFAGOS U-937 45 4.8 INDUCCIÓN DE APOPTOSIS 45 4.9 TINCIÓN CON Annexin V-PE Y 7AAD PARA MEDIR LOS NIVELES DE EXTERIORIZACIÓN DE LA FOSFATIDILSERINA EN MACRÓFAGOS U-937 46 4.10 TINCIÓN DE TUNEL PARA MEDIR LA FRAGMENTACIÓN DEL ADN EN MACRÓFAGOS U-937 47 4.11 TINCIÓN CON Syto 16 Y Annexin V-Alexa 568 PARA MEDIR LA VIABILIDAD DE Leishmania DENTRO DEL MACRÓFAGO APOPTÓTICO 49 4.11.1 Evaluación de las láminas por microscopía de fluorescencia 50 5. ANÁLISIS ESTADÍSTICO 52 8 pág. 6. RESULTADOS 53 6.1 LA INFECCIÓN CON ESPECIES DE Leishmania TIENE EFECTO SOBRE LA APOPTOSIS Y NO SOBRE LA NECROSIS DEL MACRÓFAGO 53 6.2 EFECTO DIFERENCIAL DE LA INFECCIÓN CON ESPECIES DE Leishmania EN LA APOPTOSIS DEL MACRÓFAGO DETERMINADA POR EXTERIORIZACIÓN DE FOSFATIDILSERINA 55 6.3 EFECTO DIFERENCIAL DE ESPECIES DE Leishmania EN LA APOPTOSIS DEL MACRÓFAGO, DETERMINADA POR FRAGMENTACIÓN DEL ADN 58 6.4 LOS AMASTIGOTES DE L. panamensis, L. mexicana Y L. donovani SOBREVIVIERON A LA APOPTOSIS DEL MACRÓFAGO 61 6.5 EMISIÓN DE FLUORESCENCIA DE LAS CEPAS L. panamensis, L. mexicana Y L. donovani TRANSFECTADAS CON GFP 69 6.6 LOS PORCENTAJES DE INFECTIVIDAD MEDIDOS POR GFP Y GIEMSA NO CAMBIARON EN EL TIEMPO PARA L. panamensis, MIENTRAS QUE PARA L. mexicana Y L. donovani PRESENTARON DIFERENCIAS SIGNIFICATIVAS EN ALGUNOS PUNTOS EN EL TIEMPO 70 6.7 L. panamensis Y L. mexicana SON MAS INFECTIVAS QUE L. donovani 72 6.8 LA CARGA PARASITARIA DE LAS TRES ESPECIES DE Leishmania EVALUADAS NO AFECTÓ LA APOPTOSIS DEL MACRÓFAGO 74 6.9 LA EMISIÓN DE GFP SE AFECTÓ POR ACCIÓN DE LA ESPECIE DE Leishmania Y DEL TRATAMIENTO DE APOPTOSIS 77 7. DISCUSIÓN 79 9 pág. 8. CONCLUSIONES 85 9. PERSPECTIVAS 86 REFERENCIAS 87spa
dc.format.mimetypeapplication/pdfspa
dc.language.isospaspa
dc.publisherIbagué: Universidad del Tolima, 2011.spa
dc.rightsAtribución-NoComercial-CompartirIgual 2.5 Colombia (CC BY-NC-SA 2.5 CO)spa
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/co/spa
dc.subjectApoptosisspa
dc.subjectLeishmaniaspa
dc.subjectMacrófagospa
dc.subjectInhibiciónspa
dc.subjectInducciónspa
dc.subjectPersistenciaspa
dc.titleEfecto de la infección con leishmania panamensis, l. mexicana y l. donovani sobre la apoptosis de macrófagos u937.spa
dc.typeTrabajo de grado - Maestríaspa
dc.contributor.colaboratorValderrama, Liliana (Directora)spa
dc.contributor.colaboratorVallejo, Gustavo Adolfo (Codirector)spa
dc.rights.accessrightsinfo:eu-repo/semantics/openAccessspa
dc.thesis.disciplineFacultad De Ciencias, Maestría En Ciencias Biológicasspa
dc.thesis.grantorVallejo, Gustavo Adolfo (Codirector)spa
dc.thesis.grantorValderrama, Liliana (Directora)spa
dc.thesis.levelMaestríaspa
dc.thesis.nameMagíster en Ciencias Biológicasspa
dc.type.dcmi-type-vocabularyTextspa
dc.type.driverinfo:eu-repo/semantics/masterThesisspa
dc.type.versioninfo:eu-repo/semantics/updatedVersionspa
dc.identifier.localT0938 031-
dc.publisher.providerCountry170 COL COspa
Appears in Collections:AEA. Tesis y Trabajos de Grado



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